產(chǎn)品簡介
隨機突變是闡述蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能之間的關(guān)系、改進(jìn)蛋白質(zhì)性能的重要工具。StarMut 隨機突變試劑盒基于易錯 PCR(error-prone PCR)技術(shù),,利用 Taq DNA polymerase 不具有 3′→5′ 校對功能的特性,在特定的反應(yīng)緩沖體系中,,向擴(kuò)增的目的基因中引入隨機突變密碼子。帶有隨機突變的擴(kuò)增產(chǎn)物通過雙酶切,,連接到表達(dá)載體中構(gòu)建文庫,,然后轉(zhuǎn)化入表達(dá)宿主中,進(jìn)行蛋白活性篩選,。如果經(jīng)一次突變反應(yīng)不能獲得滿意的結(jié)果,,可采用連續(xù)易錯 PCR(sequential error-prone PCR)策略,即將一次 PCR 擴(kuò)增得到的有用突變基因作為下一次 PCR 擴(kuò)增的模板,,連續(xù)反復(fù)地進(jìn)行隨機誘變,,使每一次獲得的突變累積而產(chǎn)生更有意義的突變。本試劑盒包含有優(yōu)化的 2×StarMut Random System,、StarMut Enhancer 和 Sterile Water 三種組分,使用時只需加入適量的 DNA 模板和合成的兩條擴(kuò)增引物,,并用水補足體積,,即可進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng),操作簡便快速,,大大減少了多次加樣可能造成的出錯和污染機會,。2×StarMut Random System 含有優(yōu)化濃度的 Taq DNA polymerase、dNTPs,、反應(yīng)緩沖液和穩(wěn)定劑,,可最大限度地克服常規(guī)易錯 PCR 技術(shù)中,由于 Taq DNA polymerase 本身的偏愛性造成的以 GC 突變?yōu)橹鞯娜秉c,,獲得相對均衡的突變譜,。堿基突變率可通過適量添加 StarMut Enhancer、調(diào)整模板 DNA 量和改變 PCR 擴(kuò)增循環(huán)數(shù)進(jìn)行控制,。
下表列出以 10 ng 質(zhì)粒 DNA 為模板,,PCR 擴(kuò)增一條 1 kb DNA 片段(20個循環(huán))后測序檢測得到的突變率結(jié)果。需要注意的是,,由于不同 DNA 模板的堿基組成不同,、長度不一,,以及不同引物的擴(kuò)增效率存在差異,所以即使在相同的 PCR 反應(yīng)條件下,,兩組 PCR 產(chǎn)物所得到的突變率也可能不同,。因此我們建議根據(jù)實驗的具體要求,首先進(jìn)行多個小體系(20 μl)擴(kuò)增預(yù)實驗,,分別加入不同體積的 StarMut Enhancer(如 0 μl,、1μl、5 μl,、10 μl 等),,摸索出符合目標(biāo)突變率的反應(yīng)條件后,再放大擴(kuò)增體系,。其他影響突變率的因素見【注意事項】,。
以 50 µl PCR 反應(yīng)體系為例:
反應(yīng)條件 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
---|---|---|---|---|---|---|
StarMut Enhancer(μl) | 0 | 1 | 2.5 | 5 | 10 | 20 |
突變堿基的個數(shù)/1 kb | 0~1 | 0~3 | 0~4 | 1~6 | 3~10 | 5~18 |
平均突變堿基數(shù)/1 kb | 0.3 | 1.6 | 2.3 | 4.1 | 6.5 | 10.2 |
產(chǎn)品組分
組分貨號 | 組分名稱 | T115-01 |
---|---|---|
ZT115-101 | 2×StarMut Random PCR Mix | 500 μl |
ZT115-102 | StarMut Enhancer | 400 μl |
ZA129-101 | Sterile Water | 1 ml |
保存條件
-20℃ 保存,,保質(zhì)期 12 個月;經(jīng)常使用,,可于 4℃ 保存,,保質(zhì)期 3 個月。
產(chǎn)品變更
該產(chǎn)品原中文名稱為:StarMut 隨機突變試劑盒,。自 2022.4.12 起變更為現(xiàn)用名,。
請按照實際實驗情況進(jìn)行使用,如有疑問,,請聯(lián)系您的業(yè)務(wù)員或致電技術(shù)支持熱線01069738797,!